Amplification de l'ADN par PCR
Après avoir extrait l’ADN des feuilles d’ignames, il est nécessaire d’amplifier cet ADN car il est en trop faible concentration. Nous n’allons pas amplifier tout le génome d’Igname sur toute sa longueur, mais seulement certaines zones ciblées, grâce à une technique : la PCR (Polymerase Chain Reaction). Cette technique consiste à obtenir un très grand nombre de copies d’une zone cible d’ADN. Les copies sont fabriquées par une enzyme : l’ADN polymérase. Les zones à cibler sont repérées par des « amorces » :
Schéma du principe d’amplification par PCR
Nous avons mis dans chaque tube : l’extrait d’ADN d’Igname, une amorce, des nucléotides et des sels magnésium, et l’ADN polymérase. Puis, nous avons placé tous les tubes dans le thermocycleur programmé pour réaliser 35 cycles composés :
- d’une dénaturation (ouverture de la molécule d’ADN par chauffage à 95°C),
- d’une hybridation (accrochage de l’amorce à 49°C, 55°C ou 57°C selon l’amorce)
- et d’une élongation (fabrication d’ADN par l’ADN polymérase à 72°C).
La PCR a été réalisée avec huit amorces différentes, sur 2 extraits d’ADN de chacune des 5 variétés d’Igname de notre étude.
A chaque fois, un témoin négatif a été prévu (de l’eau à la place de l’extrait d’ADN dans le tube de PCR). Ainsi qu’un témoin positif (ADN de l’Igname INRAX17, déjà testé l’année passée).