Électrophorèse: principe de l'électrophorèse
L'électrophorèse sur gel d'agarose est une méthode utilisée en biochimie et en biologie moléculaire pour séparer l'ADN, l'ARN ou des protéines en fonction de leur poids moléculaire.
La technique de l'électrophorèse sur gel d'agarose est basée sur la séparation des acides nucléiques chargés négativement sous l'effet d'un champ électrique. Cette séparation s'effectue à travers la matrice du gel d'agarose : les molécules de plus petites tailles se déplacent plus rapidement et migreront plus loin que les molécules de tailles supérieures.
L'électrophorèse consiste à faire migrer des ions sous l'effet d'un courant électrique égal à 275 V. Chaque échantillon est déposé dans un puits du gel d'Agarose.
La méthode de révélation la plus utilisée est la révélation au bromure d'éthydium ou BET. Le bromure d'éthydium est un agent d'intercalation couramment utilisé comme marqueur d'acide nucléique dans les laboratoires de biologie moléculaire. Lorsqu'il est exposé à des rayonnements ultraviolets, il devient fluorescent avec une couleur rouge-orangée, 20 fois plus intense lorsqu'il est lié à l'ADN.
Le bromure d'éthydium étant un produit dangereux , nous ne l'avons pas utilisé.
Nos électrophorèses ont été réalisées sur des gels prêts à l'emploi de la marque LONZA (système FlashGel pour ADN concentré à 2,2%). Les bandes d'ADN sont révélées par une lampe UV intégrée dans le support du gel.