Vérification des résultats
Après avoir réalisé l’amplification de l’ADN des différentes zones sur le génome par la PCR, nous avons effectué des tests sur mini-gels d’électrophorèse LONZA afin de vérifier si l’extraction et l’amplification de l’ADN ont bien été menées.
cet appareil, constitué d'un gel d'agarose auquel on soumet un courant électrique de 250V, permet de séparer les fragments d'ADN contenus dans le tube de PCR selon leur taille.
Chaque échantillon de PCR (5 µl) est déposé dans un puits du gel d'agarose :
Une fois la migration réalisée, on peut ensuite visualiser les bandes d'ADN en éclairant aux UV.
Les résultats sont les suivants :
mDaCIR2, mDaCIR3, ....mDaCIR63 sont les noms des 8 amorces utilisées pour cibler les zones à amplifier par PCR.
Le ladder est un marqueur de taille.
La présence des témoins négatifs (avec H2O) permet d'éliminer de la lecture des gels les bandes qui sont présentes tout en bas, puisqu'elles sont aussi présentes dans les témoins négatifs.
L'analyse des gels permet de retenir les résultats suivants :
Finalement, seules 3 variétés d'Igname seront retenues (INRAX17, Poule et Jaune) et 4 zones amplifiées (avec mDaCIR2, mDaCIR8, mDaCIR26 et mDaCIR63).
Ces échantillons peuvent être envoyés au Génoscope pour y être séquencés!! .....et c'est chose faite !!
Rendez-vous à la rentrée prochaine pour l'analyse des séquences....et la réponse à notre question......