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Conditions de nos PCR

Nous avons réalisé nos PCR grâce à un appareil appelé thermocycleur 

appareil PCR.jpg 20160412_120757.jpg DSCN1176.JPG

Chaque tube renferme : 

  • 2 microlitres d'ADN (ou d'H2O pour le témoin négatif)
  • 13 microlitres de mix H2O + amorces (par couple pour "borner" la zone à amplifier)
  • 15 microlitres d'enzyme Taq polymérase

Nous avons réalisé des PCR sur des extractions d'ADN de divers échantillons (=feuilles différentes) des variétés d'Ignames (ex : Pakala-1 = échantillon 1 / Pakala-3 = échantillon 3). 

Nous avons réalisé ces PCR avec 6 couples d'amorces, notées mDaCIR2, mDaCIR3,  mDaCIR38, mDaCIR57, mDaCIR59 et mDaCIR63. Les séquences de ces amorces ont été fournies par Mme Dalila PETRO de l'INRA. Elles ont été fabriquées par l'entreprise Eurogentec, puis nous ont été envoyées par l'Ecole de l'ADN de Nîmes (tout ceci gracieusement!!)

Les cycles programmés pour ces PCR furent les suivants : 

Capture programmation excell.GIF  programmation PCR.jpg

Le thermocycleur gère seul les changements de température et la répétition des cycles.

A la fin, les tubes sont maintenus à 4°C jusqu'à ce qu'on les récupère. On les place alors au congélateur jusqu'au jour où on peut tester le résultat sur électrophorèse.

 



13/06/2016

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