Conditions de nos PCR
Nous avons réalisé nos PCR grâce à un appareil appelé thermocycleur
Chaque tube renferme :
- 2 microlitres d'ADN (ou d'H2O pour le témoin négatif)
- 13 microlitres de mix H2O + amorces (par couple pour "borner" la zone à amplifier)
- 15 microlitres d'enzyme Taq polymérase
Nous avons réalisé des PCR sur des extractions d'ADN de divers échantillons (=feuilles différentes) des variétés d'Ignames (ex : Pakala-1 = échantillon 1 / Pakala-3 = échantillon 3).
Nous avons réalisé ces PCR avec 6 couples d'amorces, notées mDaCIR2, mDaCIR3, mDaCIR38, mDaCIR57, mDaCIR59 et mDaCIR63. Les séquences de ces amorces ont été fournies par Mme Dalila PETRO de l'INRA. Elles ont été fabriquées par l'entreprise Eurogentec, puis nous ont été envoyées par l'Ecole de l'ADN de Nîmes (tout ceci gracieusement!!)
Les cycles programmés pour ces PCR furent les suivants :
Le thermocycleur gère seul les changements de température et la répétition des cycles.
A la fin, les tubes sont maintenus à 4°C jusqu'à ce qu'on les récupère. On les place alors au congélateur jusqu'au jour où on peut tester le résultat sur électrophorèse.